L’attività sperimentale, prevalentemente condotta da UNIMI-Ingegneria molecolare di proteine vegetali (Dr Alessio Scarafoni) in una prima fase sarà così articolata:
a) identificazione delle linee di mais oggetto di studio – in collaborazione con Dr Roberto Pilu (e CRA-MAC) verranno scelte più linee di mais tra quelle più comunemente utilizzate nei programmi di miglioramento genetico;
b) messa a punto delle condizioni sperimentali volte all’ottenimento, in funzione delle diverse linee utilizzate, di di peptidi e proteine rilasciati dal seme nelle mezzo di germinazione;
c) purificazione della frazione proteica da altri composti (polisaccaridi e molecole organiche a basso peso molecolare) mediante tecniche biochimiche separative tradizionali (come ad esempio precipitazioni selettive e procedure cromatografiche) e/o mediante ultrafiltrazione; la purificazione è necessaria per eliminare possibili interferenze durante l’esecuzione delle successive attività sperimentali volte alla caratterizzazione quantitativa e qualitativa del materiale proteico ottenuto;
d) analisi quantitativa dei peptidi e delle proteine rilasciate nel mezzo - i peptidi e le proteine isolate verranno quantificate mediante metodo colorimetrici; tale quantificazione permetterà anche di determinare la cinetica di rilascio del materiale proteico durante le prime fasi della germinazione;
e) test di attività biologica delle miscele peptiche – le miscele peptidiche ottenute dalle diverse linee saranno saggiate, in collaborazione con UNIMI- Micotossicologia e lotta ai funghi patogeni per la loro attività biocida nei confronti di specie fungine edafiche potenzialmente patogene per le piante.
L’attività proseguirà in una seconda fase volta alla caratterizzazione delle proteine e dei peptidi isolati durante il primo anno. Tale fase consisterà: a) nell’analisi qualitativa delle proteine rilasciate mediante approcci di tipo proteomico; si ricorrerà, quindi, a tecniche elettroforetiche monodimensionale e bidimensionali (essenzialmente IEF/SDS-PAGE, ma non si esclude l’adozione di altre tecniche elettroforetiche per la risoluzione di miscele proteiche complesse); le mappe elettroforetiche ottenute verranno analizzate mediante software specifico per la quantificazione di ogni singola proteina separata; tra tutte le proteine verranno selezionate per la successiva sperimentazione quelle rilasciate dal seme in maggiore quantità nel mezzo di germinazione e quelle che mostreranno significativi fenomeni di modulazione del loro rilascio in funzione del tempo; queste proteine verranno quindi identificate mediante spettrometria di massa ed tecniche di bioinformatica; b) saggi biologici in vivo –a seguito dell’attività sperimentale descritta nel punto precedente, gli eventuali peptidi o proteine purificate considerate di maggiore interesse saranno saggiate, in collaborazione con UNIMI-Micotossicologia e lotta ai funghi patogeni per le loro attività biocida nei confronti di specie fungine edafiche potenzialmente patogene per le piante.
- Responsabili: Guido Sali , Chiara Tonelli , Marcella Patrizia Maria Guarino , Alessio Scarafoni , Lucia Colombo , Sara Borin , Gian Attilio Sacchi, Giorgio Mario Provolo , Francesco Enzo Molinari
- Organizzatore Principale: DIPARTIMENTO DI SCIENZE E TECNOLOGIE ALIMENTARI E MICROBIOLOGICHE (attivo dal 01/11/1985 al 27/04/2012), DIPARTIMENTO DI INGEGNERIA AGRARIA (attivo dal 01/01/2009 al 26/04/2012), DIPARTIMENTO DI ECONOMIA E POLITICA AGRARIA AGRO-ALIMENTARE E AMBIENTALE (attivo dal 01/01/1993 al 26/04/2012), DIPARTIMENTO DI SCIENZE BIOMOLECOLARI E BIOTECNOLOGIE (attivo dal 01/06/2003 al 27/04/2012), DIPARTIMENTO DI BIOLOGIA (attivo dal 01/07/1979 al 26/04/2012), DIPARTIMENTO DI SCIENZE E TECNOLOGIE VETERINARIE PER LA SICUREZZA ALIMENTARE (attivo dal 01/01/2001 al 27/04/2012), DIPARTIMENTO DI PRODUZIONE VEGETALE (attivo dal 01/01/2000 al 27/04/2012), DIPARTIMENTO DI SCIENZE MOLECOLARI AGROALIMENTARI (attivo dal 01/01/1988 al 27/04/2012)
- Ente Finanziatore: REGIONE LOMBARDIA
- Tipologia: RL_PRES - Bandi Presidenza
- Coordinatore: UNIVERSITA' DEGLI STUDI DI MILANO
- Anno di inizio: 2011
- Durata: 24 mesi
- Stato: Chiuso